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AC16人心肌细胞的培养步骤--智立中特生物

AC16人心肌细胞的培养步骤--智立中特生物
2022-09-21
  一、细胞简介:

  AC16人心肌细胞可以连续传代,并且当在无有丝分裂原的培养基中培养时可以分化。这些细胞可用于研究心肌细胞的发育调控。

  细胞名称:AC16人心肌细胞

  平台编号:zl-056853

  细胞特性

  1)来源:人心脏组织

  2)形态:成纤维细胞样,贴壁生长

  3)含量:>1x106细胞数

  4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

  5)用途:仅供科研使用。

  二.培养基及培养冻存条件准备:

  1)准备DMEM/F-12(专用)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗1%。

  2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。2-3天换液一次

  3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

  三、细胞处理:

  1)冻存细胞的复苏:

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

  3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

  四、运输和保存

  干冰运输及复苏好存活细胞

  (1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

  (2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

  五、细胞接收后的处理

  1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

  2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

  3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

  4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。

  智立中特(武汉)生物科技有限公司是一家集生物研发,生产,销售,售后为一体的高新技术产业公司。拥有载体质粒,载体,国内外微生物菌种资源,感受态细胞,培养基,细胞株等广泛的生产销售线。

  
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