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NB2-11大鼠淋巴瘤细胞的处理步骤及方法--现货

NB2-11大鼠淋巴瘤细胞的处理步骤及方法--现货
2022-09-20
  一、细胞简介:

  大鼠淋巴瘤细胞NB2-11取自雄性Nb大鼠。

  细胞名称:NB2-11大鼠淋巴瘤细胞

  平台编号:zl-017079


  培养体系:DMEM高糖(不含丙酮酸钠)+10%FBS+1%三抗

  培养温度:37℃

  二氧化碳浓度:5%

  注释:Doublingtime:12hours

  二、Nb2-11大鼠淋巴瘤细胞收到后处理:

  细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。

  收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时。

  镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液收集至离心管中,加入6ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。(注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松)

  三、Nb2-11大鼠淋巴瘤细胞培养步骤:

  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

  3.轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

  4.按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。

  2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

  方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

  方法三:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

  四、参考文献

  PubMed=7895694;DOI=10.1210/endo.136.4.7895694

  GilksC.B.,PorterS.D.,BarkerC.,TsichlisP.N.,GoutP.W.

  Prolactin(PRL)-dependentexpressionofazincfingerprotein-encodinggene,Gfi-1,inNb2lymphomacells:constitutiveexpressioninautonomoussublines.

  Endocrinology136:1805-1808(1995)

  PubMed=9890649;DOI=10.1016/S0891-5849(98)00183-X

  BodeA.M.,LiangH.Q.,GreenE.H.,MeyerT.E.,BuckleyD.J.,NorrisA.,GoutP.W.,BuckleyA.R.

  AscorbicacidrecyclinginNb2lymphomacells:implicationsfortumorprogression.

  FreeRadic.Biol.Med.26:136-147(1999)

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